Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩充

从第一次消失呼吸道自身抗本体到消失1型式高血压诊疗症状的十分困难部将在儿童时期就有比较好的描绘，多个呼吸道自身抗本体乙型肝炎的儿童早先有70%在血清反转后10年内患上高血压，而随访15年的儿童这一比重降低到84%。来得之下，占多数诊疗1型式高血压一半以上的型式1型式高血压的发作机制还很难得到适当的研究课题。

更加多的人开始用到再行系统来定义1型式高血压的十分困难：个本体在消失多种呼吸道自身抗本体时带入第1下一阶段，消失低血糖异常时带入第2下一阶段，消失症状时带入第3下一阶段。一些多发呼吸道自身抗本体乙型肝炎的个本体，在1期和2期，十分困难较极快，并发展为发作的1型式高血压。我们早先描绘了一第一组在首次检查到多种呼吸道自身抗本体试样后至少10年无高血压的极极快十分困难者，这第一组患儿伤亡人数少，但形态十分明确。随后，我们推测呼吸道自身上皮细胞特异性CD8+T肝细胞中间体当在十分困难快速的患儿早先基本不存在，但在近期发作和经常性存在的高血压患儿早先很十分容易检查到。这可能表明，与十分困难患儿来得，这些患儿血栓中间体当的适度进一步提高。

最初研究课题表明，尽管适度性T肝细胞(Treg)数量正常，但高血压患儿存在一些新功能缺陷，其早先包括对IL-2的中间体当意志力降低。此外，高血压患儿早先的振荡当CD4+T肝细胞可能对适度愈来愈具抵抗性，观感为振荡当T肝细胞的依赖性移向，自然产生的Treg和本体外产生的诱导Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T肝细胞早先IL-2中间体当移向。本研究课题的目的是描绘了CD4+适度性T肝细胞(Treg)在一小群极快速十分困难者早先的形态，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以这群人结合的纵向研究课题，在21岁都有确诊的患儿亲属早先检查1型式高血压的脆弱因素。我们早先描绘了经常性快速十分困难者的形态，他们保持多重呼吸道自身抗本体乙型肝炎高达10年，但很难消失高血压的诊疗症状，极快性或非同步进行性血栓。随后，10名继续保持无高血压并愿意提供大量肾脏试样的快速十分困难者确立T和B肝细胞新功能深入研究课题。在目前的研究课题早先，8名极快十分困难者(SP第一组)，早先位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的呼吸道自身抗本体乙型肝炎。所有的旁观者都保持稳定1型式高血压十分困难的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身抗本体对某些上皮细胞的乙型肝炎中间体当，然而，一名患儿已经保持稳定2期至少6年，但很难消失诊疗症状，一名患儿被诊断为高血压，该受试者72岁，在采自实验试样时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在生物信息学早先对该供本体同步进行了实际上分析报告。受控外周血单个氘肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞术和T肝细胞依赖性实验分析报告供本体早先Treg的频带、性状式和新功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类化验、相关联和复出)同步进行无行政官员聚类深入研究课题，分析报告Treg性状式。

结果：与卫生供本体来得，来自极快十分困难本体的思绪CD4+T肝细胞的行政官员聚类看出，应答的思绪CD4+ Treg频带降低，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)透露降低有关。一名HbA1c急剧下降的患儿与十分困难快速者和反转的对照第一组来得，Treg可知有所完全相同。新功能深入研究课题表明，与卫生供本体来得，来自快速十分困难本体的Treg细胞内的CD4+振荡当T肝细胞依赖性轻微受损。观感为对振荡当CD4+T肝细胞CD25和CD134透露的依赖性降低。

所示1 深入的性状式深入研究课题看出，CD4+Treg变异式在极快十分困难函数调用早先降低。由FlowSOM聚合的Treg室，挤满在来自所有供本体的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标上物透露化验出10个元簇:思绪T肝细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T肝细胞;HLA-DR + GITR +思绪T肝细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用到9个完全相同Treg标上聚合的10个元簇的MST。每个链表代表人一个一个大(100个一个大)，愈来愈大的元一个大(10个元一个大)在链表第一组周围打磨。每个链表早先的饼所示透露单个标上的透露高级别。(b)每个元聚类的热所示，以看出整本体标上透露。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)聚合所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的基岩。(e-l)一般来说同位素为每个metacluster筒线或所示(同位素> 0.05%)确定为HD和SP第一组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T肝细胞(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T肝细胞(l)。浅蓝色带子代表人这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推字母秩化验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用到CITRUS的外推式推测，Treg频带的降低是十分困难快速的标记。分级制度细胞内(a - f)和柑橘深入研究课题(g-k)比较SP旁观者和反转的HD旁观者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)基因型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的传奇色彩所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR透露同步进行受控，虚拟FlowSOM群本体。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)第一组以及供本体SP 606(浅蓝色)早先CD25+ cd127的频带汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+细胞内子集的筒线或所示;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)油菜簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3透露强度著色，斜线突出的簇被识别为SP和HD函数调用错综复杂的完全相同。(j)筒线或所示看出了在SP(虎纹)和HD(灰点)第一组早先，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的一般来说同位素(比重)。(k)直方所示看出每个簇的性状式(紫色)和Treg标上一般来说透露与文化背景透露(浅蓝色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。文化背景与所有其他簇早先标上的透露有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推字母秩化验

所示3 与卫生献血者来得，十分困难快速者思绪treg的GITR降低。每个思绪CD4+T肝细胞元簇(思绪T肝细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T肝细胞;HLA-DR + GITR +思绪T肝细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个透露标上的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的透露热所示(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇早先所有HD(棕色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR透露串联，看出直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon类推字母秩和化验，p< 0.07(浅蓝色)所有供本体包括，p< 0.05(浅蓝色)供本体SP 606和反转的HD不包括在测试早先。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs早先GITR透露，从分级制度细胞内，从所有HD(棕色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)串联，看出直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推字母秩化验

所示4 来自快速十分困难的CD4+ treg肝细胞掌控振荡当CD4+T肝细胞的意志力降低。SP第一组用浅蓝色的线或和带子透露，HD第一组用灰色的线或和带子透露，浅蓝色的线或/带子透露供本体sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞同步进行分选。CD4+CD25−(应当答者)被标上为CFSE, Treg按检视的比重硫酸铜。用抗CD3 /28微珠重置肝细胞，培育3天后同步进行流式肝细胞术检查。(a-d)与CD4+应当答者一般来说应当的treg培育(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应当答者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性比重(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性比重。用到乙型肝炎对照(应答的响应当肝细胞仅有treg)算出依赖性比重。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究课题。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 振荡当CD4+T肝细胞对快速十分困难的T肝细胞重置的依赖性愈来愈引人注目。SP第一组用浅蓝色的线或和带子透露，HD第一组用灰色的线或和带子透露，浅蓝色的线或/带子透露供本体sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞同步进行分选。CD4+CD25−(应当答者)被cfsel标上，treg按检视的比重硫酸铜。用抗CD3 /28微珠重置肝细胞，培育3天后同步进行流式肝细胞术(CD25反染)和肝特异性深入研究课题。HD Treg与HD、SP或sp606应当答者一同培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性前年(b)。(c,d) CD25依赖性前年(c)和CD134依赖性前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育早先的透露。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究课题。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自快速十分困难子的重置思绪CD4+Treg在GITR透露早先得到了扩展和丰富，强调了进一步研究课题Treg在1型式高血压风险个本体早先的举例来说的愈来愈进一步。

原意出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28